金线莲组织培养研究进展

 金线莲喜阴凉、潮湿，通常生长在常绿阔叶林的石壁等潮湿地带，温度为20-25℃，光照约为正常日照的1/3，忌阳光直射，生产条件特殊，人为过度采收，导致野生资源濒临灭绝，已被列人台湾29种需要保护的稀有植物之一，福建省也将其列为省级药材保护品种。由于金线莲发育中形成的生物特性使其自然繁殖和人工栽培繁殖都很困难，为了更好的保护和开发金线莲，近年来利用组织培养方式繁殖已成为研究的热点。

    金线莲种子不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才促进种子萌发生长，但发芽率很低，以分根法或扦插方式繁殖，时间较长而且繁殖倍数不高，组织培养技术的发展为生产贵重药材提供了可能性。

    李梅等研究了从种子诱导丛生芽的途径，初步建立了台湾金线莲试管苗的组织快速培养流程。王雅英等以金线莲试管苗带节茎段和顶芽为外植体，用正交试验筛选培养基配方，并研究二类生根粉（ABT）对促根状苗的作用。陈永快等以福建和台湾两种金线莲的幼嫩茎段为外植体，进行组织培养研究，不同激素浓度配比的培养基对金线莲的分化、生根有显著影响。

    福建金线莲最佳丛生芽诱导和增殖培养基配方分别为MS+6BA 4.0mg/L+NAA 0.lmg/L和MS+6BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L；台湾金线莲的最佳丛生芽诱导和增殖培养基配方分别为MS+6BA 5.0mg/L+NAA 0.lmg/L和MS+6BA 3.0mg/L+NAA 0.lmg/L。两种金线莲的最佳生根培养基均为1/2MS+IBA l.0mg/L或者1/2MS+NAA 0.5mg/L。

    吴坤林报道光照强度对金线莲的生长发育的影响较明显，在低光强度下金线莲组培苗表现为徒长，纤弱，在2000-3000Lux光强下生长旺盛，叶面积茎径适中，符合金线莲商品的质量标准。目前金线莲的研究大部分集中在组织培养中激素配比和光照条件的影响，温度对其生理生化影响报道较少。牛蓓等利用人工气候培养箱，系统地研究温度对金线莲生长与代谢的影响，在同一光照强度和几种不同温度对金线莲进行处理，并用751G紫外-可见光的分光光度计和DDS-12A数字电导仪分别测定金线莲的过氧化物酶酶活、可溶性蛋白质含量、可溶性多糖含量，丙二醛含量和电导率，结果表明金线莲的丙二醛含量和相对电导率以及过氧化物酶活性受温度影响，金线莲在本实验温度范围内，最适生长温度为25℃，最不适生长温度为35℃，为金线莲的组织培养及快繁提供理论和实践依据。

    虽然组培快繁金线莲已取得成功，但受微生物污染十分严重。在实验室中污染率有时高达50%,影响了金线莲的正常生长，因此如何减少培养过程中的微生物污染是组织培养技术实现规模化生产的重点和难点。

    组培容器是材料生存的微环境，通过酸化培养基在培养基中加人抗生素、抑菌剂能够获得降低污染的效果。抗生素抑菌在动物细胞培养中早已被广泛应用。但在植物组织培养中尚处于开始阶段。许婉芳等将不同抗生素加人金线莲培养基中，抑制细菌和霉菌的生长，取得良好效果。结果表明最佳抗生素组合为制霉菌素40（U/mL）、卡那霉素40（U/mL）、庆大霉素200（U/mL）。研究同样发现，在培养基中加人杀菌剂可以抑制细菌和真菌的生长，50%多菌灵的效果优于70%甲基托布津和25%甲霜灵，其抑菌率达100%，且能促进金线莲生长。实践中，抗生素一般不稳定，遇酸、碱或加热都易分解而失去活性，对瓶苗的分化和生长有一定的抑制，在组培规模化育苗中应用。由于抑菌剂、抗生素不耐热须人工在超净工作台逐瓶加人，工作量大，成本增加，从而降低经济效益，所以寻找和开发性能稳定、价格适宜的抑菌剂还有待更深人的研究。

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